乳與乳制品中非蛋白氮含量測定方法的改進
乳與乳制品中非蛋白氮含量測定方法的改進
乳與乳制品中非蛋白氮含量測定解決方案
起草人：王靜 端禮欽等
1范圍
本方案適用于乳與乳制品中非蛋白氮含量的測定方法。
本方案檢出限為4.0×10-5 g/100 g
2 原理
用15%的三氯乙酸沉淀乳與乳制品中的蛋白質(zhì),離心取上清液，經(jīng)催化消化，分解出的氨與硫酸結(jié)合生成硫酸銨。然后堿化蒸餾使氨游離，用加有指示劑的硼酸吸收后，用0.02 mol/L HCl滴定，根據(jù)酸的消耗量換算樣品中非蛋白氮的含量。
3 儀器與試劑
除特別說明之外，僅使用分析純試劑
3.1海能全自動定氮儀K9860：最小滴定體積3.5 μL；
3.2 SH220石墨消解儀：200-500 ℃；
3.3高速冷凍離心機：4000-12000 r/min；
3.4渦旋混合器：1500-4500 r/min；
3.5分析天平：感量0.0001 g；
3.6水：GB/T 6682一級水；
3.7蔗糖（C12H22O11）：含氮質(zhì)量分?jǐn)?shù)不大于0.002 %；
3.8濃硫酸；
3.9五水硫酸銅（CuSO4·5H2O）；
3.10硫酸鉀；
3.11鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液[CHcl=0.02 mol/L]：優(yōu)級純鹽酸，標(biāo)定按GB/T 5009.1-2003附錄B進行；
3.12三氯乙酸溶液：150 g/L；
3.13氫氧化鈉溶液：400 g/L；
3.14硼酸-指示劑（甲基紅-溴甲酚綠乙醇溶液）吸收液：取甲基紅-溴甲酚綠乙醇溶液指示劑（甲基紅1 g/L-溴甲酚綠5 g/L）10 mL與20 g硼酸定容至1 L，用0.05 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)整pH至4.2左右。
4分析步驟
4.1試樣制備
貯藏在冰箱中的乳與乳制品，應(yīng)在試驗前取出回復(fù)至室溫。
液態(tài)試樣：搖勻后，置于離心管中準(zhǔn)確稱取試樣5.0000 g。
固態(tài)試樣：置于離心管中準(zhǔn)確稱取試樣5.0000 g。乳粉加人45 mL溫水?dāng)嚢杈鶆颍桓衫壹尤?0 mL溫水混勻；黃油溫?zé)崛刍�。吸�? mL樣品稱量，待測，精確到0.0001 g。
4.2 樣品處理
往盛有樣品的離心管中加入15 mL 15%三氯乙酸溶液，準(zhǔn)確稱量，漩渦3 min，8000 r/min離心5 min，準(zhǔn)確稱取10 g上清液置于消解管中，再加入0.1 g CuSO4•5H2O，2 g K2SO4及5 mL濃硫酸。置于消解儀中，260℃消解至泡沫停止，420℃消解1 h。取下放冷，加入10 mL去離子水。
4.3 定氮蒸餾
往定氮儀中放置好指示劑-硼酸吸收液和0.02 mol/L 鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液。將消解管置于定氮儀中，設(shè)置每樣加入20 mL 400 g/L NaOH溶液，運行定氮儀進行自動蒸餾滴定。
4.4 空白試驗
試劑空白試驗：取0.1 g蔗糖于離心管中，其余步驟相同。
儀器空白試驗：取一潔凈消解管，加入10 mL去離子水，進行蒸餾滴定。
5結(jié)果計算
6精密度
在重復(fù)性條件下獲得的三次獨立測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不得超過5%。
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